微孔濾膜過濾除菌
一、實驗意圖要求 (1)了解過濾除菌的原理。 (2)把握微孔濾膜過濾除菌的辦法。 二、基本原理
雖然有報道稱原核細菌小**納米(10-9m)級，大可達0．1～0．3mm乃**
0．75mm(非洲納米比亞球菌)，一些真核微生物如蘑菇、木耳等擔子菌也非常大。但jue大部分微生物都是微米級(10-6mm)，常用的微孔濾膜可以把jue大部分細菌別離開來。過濾除菌是依據(jù)微生物的巨細，如原核微生物的尺度為1～10μm(球菌0．5～2μm，桿菌長1～8μm、寬0．5～1μm，螺旋菌長5～50μm、寬0．5～5μm)，真核微生物的尺度為10～100μm(粗略地說，真核微生物和原核微生物巨細存在10：1的遞減規(guī)則)，挑選孔徑不同的濾膜，經過機械效果濾去液體或氣體中微生物的辦法(圖1—2)。
這是一種非殺滅性除菌方法，實際上到達菌液別離的作用。詳細試驗應根據(jù)不同的需求選用不同的濾器和濾板資料。市面上常見的微孔濾膜有醋酸纖維酯和硝酸纖維酯濾膜等，孔徑有0．025μm、0．05μm、0．10μm、0．20μm、0．22μm、0．30μm、0．45μm、0．60μm、0．65μm、0．80μm、1．00μm、2．00μm、3．00μm、5．00μm、7．00μm、8．00μm和10．00μm等，試驗室除菌用一般挑選0．22μm，但除病毒需挑選更小孔徑的濾膜。大濾板有石棉濾板、K型濾板(孔徑**大，作一般弄清用)、EK濾板(濾孔較小，用以去除一般細菌)、EK-S濾板(濾孔**小，可阻撓大病毒經過)。
此法除菌的**大長處是能夠不損壞溶液中各種物質的化學成分，適用于酶、朊、核酸、抗生素、病毒等活性分子的過濾，但由于濾量有限，所以一般只適用于試驗室中小量溶液的過濾除菌。跟著反滲透技能的逐步老練和成本下降，大規(guī)模的過濾除菌工業(yè)使用也現(xiàn)已呈現(xiàn)：在礦泉水、純凈水出產制造過程中已有使用。
三、試驗資料與設備 1．培養(yǎng)基
2％的葡萄糖溶液(葡萄糖試劑需滿意HG／T 3475 —1999《化學試劑葡萄糖》要求)、肉湯朊胨瓊脂培養(yǎng)基(平皿)、養(yǎng)分肉湯。
肉湯朊胨瓊脂培養(yǎng)基制造：朊胨10g，牛肉膏5g，NaCl 5g，蒸餾水1000mL，瓊脂16g，調理pH**7．2，分裝克氏瓶，每瓶150mL，121℃、20min滅菌，后平放成平板。養(yǎng)分肉湯類有YY／T1187—2010《養(yǎng)分肉湯培養(yǎng)基》可作參考，制造：朊胨10．0g，牛肉粉3．0g，NaCl 5．0g(質量應滿意GB／T 1266—2006《化學試劑氯化鈉》)，pH值7．2±0．2(25℃)，加熱溶解于1000mL蒸餾水中，分裝三角瓶或試管，121℃高壓滅菌15Dmin備用。
如無特別闡明，本書及附錄中所有藥品均為市售剖析純(AR)或生物化學純(BR)或以上純度等級試劑，蒸餾水為雙蒸水或去離子水，所有市售化學藥品應滿意有關G家法律法規(guī)、規(guī)范和／或技能規(guī)范等。我G現(xiàn)已擬定施行的化學試劑規(guī)范有280多條，如GB／T1266—2006《化學試劑氯化鈉》等，為了便利閱覽，在本書相應初次提及的當?shù)兀甲髁颂崾尽?nbsp;
2．儀器或其他用具
注射器、微孔濾膜過濾器、0．22μm／0．45μm濾膜、無菌試管、鑷子、玻璃刮棒、真空泵或水泵、砂芯過濾設備。有關設備**少應滿意GB／T u415 89《實驗室燒結(多孔)過濾器孔徑、分級和商標》等的要求。
四、操作過程 1．很多液體過濾除菌
將0．22μm孔徑的濾膜裝入清洗潔凈的砂芯過濾設備中，旋緊或稍真空抽濾，壓平(如用一次性預滅菌的帶膜針式濾頭則無此過程)，包裝滅菌(0．1MPa、121．5℃滅菌20min)后待用。
2．針孔過濾器
將滅菌濾器的進口在無菌條件下以無菌操作方法銜接于裝有待濾溶液(2％葡萄糖溶液)的注射器上，將針頭與出口處銜接并刺進帶橡皮塞的無菌容器中(圖1一3)。 3．壓濾
將注射器中的待濾溶液加壓緩緩擠入過濾到無菌試管中，濾畢將針頭拔出。 注意：壓濾時，用力要適中，不可太猛、太快，以免細菌被擠壓通過濾膜。 4．無菌檢查以無菌操作吸取除菌濾液0．1mL或許直接將濾膜培育于朊胨瓊脂平板上，涂布均勻，置37℃溫室中培育24h，查看是否有菌成長。
5．清洗
棄去砂芯過濾設備上的微孔濾膜，將砂芯過濾設備清洗潔凈，并換上一張新的微孔濾膜組裝包扎，再經滅菌后使用。
注意：整個進程應在無茵條件下嚴厲無茵操作，以防污染。過濾時應防止各連接處呈現(xiàn)滲透現(xiàn)象。
歸納比較上述**部分到第五部分介紹的消毒、殺菌和除菌辦法，可見各有各的特色、用途和規(guī)模，具體和特定條件下選用哪種辦法，應歸納起來考慮。除經濟考慮外，針對原料和環(huán)境要素，比較各類辦法(表1—3)，以供參閱。
雖然有報道稱原核細菌小**納米(10-9m)級，大可達0．1～0．3mm乃**
0．75mm(非洲納米比亞球菌)，一些真核微生物如蘑菇、木耳等擔子菌也非常大。但jue大部分微生物都是微米級(10-6mm)，常用的微孔濾膜可以把jue大部分細菌別離開來。過濾除菌是依據(jù)微生物的巨細，如原核微生物的尺度為1～10μm(球菌0．5～2μm，桿菌長1～8μm、寬0．5～1μm，螺旋菌長5～50μm、寬0．5～5μm)，真核微生物的尺度為10～100μm(粗略地說，真核微生物和原核微生物巨細存在10：1的遞減規(guī)則)，挑選孔徑不同的濾膜，經過機械效果濾去液體或氣體中微生物的辦法(圖1—2)。
這是一種非殺滅性除菌方法，實際上到達菌液別離的作用。詳細試驗應根據(jù)不同的需求選用不同的濾器和濾板資料。市面上常見的微孔濾膜有醋酸纖維酯和硝酸纖維酯濾膜等，孔徑有0．025μm、0．05μm、0．10μm、0．20μm、0．22μm、0．30μm、0．45μm、0．60μm、0．65μm、0．80μm、1．00μm、2．00μm、3．00μm、5．00μm、7．00μm、8．00μm和10．00μm等，試驗室除菌用一般挑選0．22μm，但除病毒需挑選更小孔徑的濾膜。大濾板有石棉濾板、K型濾板(孔徑**大，作一般弄清用)、EK濾板(濾孔較小，用以去除一般細菌)、EK-S濾板(濾孔**小，可阻撓大病毒經過)。
此法除菌的**大長處是能夠不損壞溶液中各種物質的化學成分，適用于酶、朊、核酸、抗生素、病毒等活性分子的過濾，但由于濾量有限，所以一般只適用于試驗室中小量溶液的過濾除菌。跟著反滲透技能的逐步老練和成本下降，大規(guī)模的過濾除菌工業(yè)使用也現(xiàn)已呈現(xiàn)：在礦泉水、純凈水出產制造過程中已有使用。
三、試驗資料與設備 1．培養(yǎng)基
2％的葡萄糖溶液(葡萄糖試劑需滿意HG／T 3475 —1999《化學試劑葡萄糖》要求)、肉湯朊胨瓊脂培養(yǎng)基(平皿)、養(yǎng)分肉湯。
肉湯朊胨瓊脂培養(yǎng)基制造：朊胨10g，牛肉膏5g，NaCl 5g，蒸餾水1000mL，瓊脂16g，調理pH**7．2，分裝克氏瓶，每瓶150mL，121℃、20min滅菌，后平放成平板。養(yǎng)分肉湯類有YY／T1187—2010《養(yǎng)分肉湯培養(yǎng)基》可作參考，制造：朊胨10．0g，牛肉粉3．0g，NaCl 5．0g(質量應滿意GB／T 1266—2006《化學試劑氯化鈉》)，pH值7．2±0．2(25℃)，加熱溶解于1000mL蒸餾水中，分裝三角瓶或試管，121℃高壓滅菌15Dmin備用。
如無特別闡明，本書及附錄中所有藥品均為市售剖析純(AR)或生物化學純(BR)或以上純度等級試劑，蒸餾水為雙蒸水或去離子水，所有市售化學藥品應滿意有關G家法律法規(guī)、規(guī)范和／或技能規(guī)范等。我G現(xiàn)已擬定施行的化學試劑規(guī)范有280多條，如GB／T1266—2006《化學試劑氯化鈉》等，為了便利閱覽，在本書相應初次提及的當?shù)兀甲髁颂崾尽?nbsp;
2．儀器或其他用具
注射器、微孔濾膜過濾器、0．22μm／0．45μm濾膜、無菌試管、鑷子、玻璃刮棒、真空泵或水泵、砂芯過濾設備。有關設備**少應滿意GB／T u415 89《實驗室燒結(多孔)過濾器孔徑、分級和商標》等的要求。
四、操作過程 1．很多液體過濾除菌
將0．22μm孔徑的濾膜裝入清洗潔凈的砂芯過濾設備中，旋緊或稍真空抽濾，壓平(如用一次性預滅菌的帶膜針式濾頭則無此過程)，包裝滅菌(0．1MPa、121．5℃滅菌20min)后待用。
2．針孔過濾器
將滅菌濾器的進口在無菌條件下以無菌操作方法銜接于裝有待濾溶液(2％葡萄糖溶液)的注射器上，將針頭與出口處銜接并刺進帶橡皮塞的無菌容器中(圖1一3)。 3．壓濾
將注射器中的待濾溶液加壓緩緩擠入過濾到無菌試管中，濾畢將針頭拔出。 注意：壓濾時，用力要適中，不可太猛、太快，以免細菌被擠壓通過濾膜。 4．無菌檢查以無菌操作吸取除菌濾液0．1mL或許直接將濾膜培育于朊胨瓊脂平板上，涂布均勻，置37℃溫室中培育24h，查看是否有菌成長。
5．清洗
棄去砂芯過濾設備上的微孔濾膜，將砂芯過濾設備清洗潔凈，并換上一張新的微孔濾膜組裝包扎，再經滅菌后使用。
注意：整個進程應在無茵條件下嚴厲無茵操作，以防污染。過濾時應防止各連接處呈現(xiàn)滲透現(xiàn)象。
歸納比較上述**部分到第五部分介紹的消毒、殺菌和除菌辦法，可見各有各的特色、用途和規(guī)模，具體和特定條件下選用哪種辦法，應歸納起來考慮。除經濟考慮外，針對原料和環(huán)境要素，比較各類辦法(表1—3)，以供參閱。
